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滴定分析法和分光光度法測定保健食品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量的研究

時間:2016-1-8 14:18:00   來源:中國食品機械網   添加人:admin

  滴定分析法和分光光度法測定保健食品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量的研究陳金東,李蔚(山東省衛生防疫站,濟南250014)健食品應用于適宜人群。因此建立D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量的檢測方法,為此種保健食品進行質量控制是很有必要的。

  經過閱測定氨基葡萄糖的有關資料,并對分光光度法和滴定法進行實驗研究發現分光光度法具有靈敏度篼、精密度高、線性好的特點,適用于保健食品中D-氨基葡萄糖的測定,滴定法具有簡便、快捷、所用儀器及試劑簡單等特點,更適用于D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量較篼的保健食品中D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量測定及原料純度測定。

  1原理1.1分光光度法原理D-氨基葡萄糖在堿性條件下與乙酰丙酮縮合形成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物。生色原與對-二甲基苯甲醒(P-dimethylamino-benzaldehyde;PDABA)在酸性條件下結合呈現紅色,在535nm測定其吸光度值與標準比較定量。

  1.2滴定法原理D-氨基葡萄糖鹽酸鹽單糖體在75乙醉溶液中,以已知摩爾濃度的乙醇鉀滴定D-氨基葡萄糖鹽酸鹽,以麝香草酚蘭為指示劑,使其與乙醇鉀形成絡合物,滴定終點時溶液呈現亮藍色。根據消耗乙醇鉀的體積,計算D -氨基葡萄糖鹽酸鹽的純度。

  2材料與方法2.1儀器2.1.1721分光光度計2.1.2電子分析天平2.2主要試劑2.2.1無水乙醇(分析純)2.2.2無水碳酸鈉(基準物質)2.2.3混合指示液A溴甲酚綠-乙醇指示液(3g/L),B甲基紅-乙醇指示液(2g/L)。A:B=3:1混合即得。

  2.2.4酚酞-乙醇指示液(10g/L)。

  2.2.5麝香草酚蘭-乙醇指示劑(10g/L)。

  2.2.6鹽酸標準溶液(0.5ml/L)取10.4ml濃鹽酸(優級純),用無水乙醇稀釋至250ml.鹽酸標準液的標定:將無水碳酸鈉在270t -3001馬福爐中灼燒至恒重。準確稱取恒重后的無水碳酸鈉0.8g左右(準度為1/萬g)。置于250ml三角瓶中,加50ml蒸餾水使其溶解,加混合指示液(2.2.5)10滴,用已配制的鹽酸(2.2.6)滴定至溶液由綠色轉變為暗紅色,煮沸2min,立即冷卻后繼續滴定至溶液呈暗紅色。同時作空白試驗。計算鹽酸標準溶液的摩爾濃度。

  2.2.7乙醇鉀溶液稱取7.0g氫氧化鉀(優級純),溶解于250ml無水乙醇中,靜置24h,吸取上清液。

  乙醇鉀溶液摩爾濃度的標定:取25ml標定后的鹽酸溶液,加入25ml蒸餾水(除去Ci)和50ml無水乙醉,搖勻,加2滴酚酞-乙醇指示液。用乙醉鉀滴定,接近終點時于50水浴上加熱lmin,立即冷卻后繼續滴定至溶液呈粉紅色。同時作空白試驗。計算乙醇鉀的摩爾濃度。

  2.2.8磷酸三鈉-四硼酸鈉溶液將0.33moI/L磷酸三鈉溶液和0.25mol/L四硼酸鈉溶液以98+2(v/v)的比例混合而成。2.2.9乙酰丙酮濃度取96.5ml磷酸三鈉-四硼酸鈉溶液,加入3.5ml乙酰丙酮,搖勻。(臨用前現配)PDABA溶液稱取PDABA1.6g,加人15ml濃鹽酸,攪拌溶解后,再加入105ml異丙醇混勻備用。

  D-氨基葡萄糖鹽酸鹽標準品(美國Sigma公司,純度3:99)。

  2.3滴定分析法2.3.1分析步驟精密稱取干燥后的樣品約lg(至1/萬g),置于干燥250ml三角瓶中,加入25ml蒸餾水,樣品溶解后,加人75ml無水乙醉,搖,放置2- 3min,加人3滴麝香草酚蘭-乙醇指示劑,用己標定過的乙醉鉀標準溶液慢慢滴定,至略有藍色出現時,在水浴上加熱lmin(<40弋),立即冷卻后繼續滴定至亮藍色,不再變色時為終點。同時作空白試驗。

  2.3.2計算公式X―D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的純度,C一滴定時所用乙醉鉀的摩爾濃度,mol/L;V―滴定時所消耗的乙醉鉀的體積減去空白所耗乙醇鉀體積,L;215.6-D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的分子質量。

  2.3.3滴定分析注意點:此分析法常用于D-氨基葡萄糖鹽酸鹽含量較高的樣品,一般用于D-氨基葡萄糖鹽酸鹽的純度測定。

  所用蒸餾水應除去C2,以減少實驗誤差。

  乙醉鉀標準溶液配制時,應靜置24h后,取上清液使用。

  乙醉鉀標準溶液可蔽光保存1月-2月,用時重新標定。

  2.4分光光度法的測定2.4.1大吸收波長的確定用722分光光度計在不同的波長下測本方法中生成物的吸光度值,通過數值比較得知,在535nm處有大吸收,因此選擇535nm作為檢測波長。

  2.4.2標準曲線的制備分別吸取llOfig/ml的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽標準液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50ml,用水補加至2.0ml,空白為2.0ml蒸餾水于25ml具塞試管中,分別相當于30、60、90、120、180pigD-氨基葡萄糖鹽酸鹽,加乙酰丙酮1.5tnl,具塞搖勻100水浴30min,取下泠卻至室溫后加PDABA溶液5.0ml搖勻放置5min,以空白管作對照,用722分光光度計在535mn處測定吸光值,進行回歸計算,得回歸方程:2.4.3準確稱取樣品0.2g左右(含D-氨基葡萄糖鹽酸鹽0.1 -0.2g)用水溶解定容至50ral,取1.0ml用水定容至50ml,取1. 0ml加1.0ml水于25m具塞試管中,加乙酰丙酮1.5ml具塞搖勻,11(:水浴30111取下冷卻至室溫后,加,仙八溶液5.1111,搖勻放置5min,測定吸光值,回歸計算樣品含量。

  3結果3.1方法的精密度實驗用滴定分析和分光光度法對同一膠囊樣品平行測6次,實驗結果見表1表1兩種分析方法精密度實驗結果方法測定值滴定分析法分光光度法3.2方法的準確度實驗取同一樣品分別加人三個不同的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽標準對照品,用兩種分析方法測定回收率,結果見表2、表3表2滴定法回收率結果序號本底值(g)加入量(g)測定量(g)回收率表3分光光度法回收率結果序號本底值(g)加入量(g)測定量(g)回收率3.3比對實驗分別取10個不同批號樣品,用兩種方法測定。實驗結果采用t檢驗得t=0.243<((o.os,18)=2.101,P>0.05兩種方法無顯著差異。見表4

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